光波变了,亮度未必立刻变
薄透明物主要让光慢一步,相位变了,振幅却几乎不变。对弱相位物体,准确合焦的普通强度像因此缺少一阶明暗。染色能增加吸收,却改变制样,也可能妨碍观察活体。
Zernike 的 1953 年讲稿从光栅缺陷和微弱鬼线讲起。他用相干参考波比较它们,揭示相对相位;显微方法由控制这种相位关系发展而来,并非发现了透明物会强烈吸光。
先在瞳面分开,再到像面相遇
物镜在后焦面附近形成光源像,直射光集中在那里,样品衍射光分布在周围。放对位置的相位条或相位环改变两者的相对相位,通常还削弱直射部分;到像面时,两束光重新叠加。
参考波没有额外拍一张样品照片。它提供一个光场,让样品带来的微小变化与之干涉。在成像结果上加一层颜色,不能完成这项光学操作。
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小相位极限,把机制算清楚
把入射光场幅度选成实数一,样品只加一个很小的无量纲相位。普通成像中,样品的一阶场与直射场正交,线性强度项消失。若只给直射场加正四分之一周期相移,理想像强度就出现与样品相位成正比的项。
下式符号对应所选正相移;反转相对相移,明暗也反转。计算忽略吸收、有限数值孔径和相位环的空间范围,用来解释对比产生,不是定量恢复相位的算法。
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亮边不一定是真实边界
实际物镜孔径有限,相位元件还会作用到部分低角衍射光,图中可能出现晕圈与内部对比减弱。没有标定传递模型,就不能把亮度普遍当成厚度、折射率或干质量。
这也要求把光学 Zernike 相衬与电子相衬成像分开。两者都有干涉,照明、相互作用势和传递函数却不同;不能因为都有“相位”,便用一次解释替两种仪器验收。
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解释图像前,先找到参考波
先读讲稿中的光栅实验与相位条,再看生物应用。进入模型后,在相同孔径下比较振幅样品与相位样品,随后改变瞳面处理。关键预测是:相对相位改变时,像的明暗该怎样变。
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