沿平行射线的投影
倾转轴沿样品的竖直方向。在这个标量模型里,每个相机像素测的是沿一条射线的积分。
E42 · 投影断层
一组倾转图像,能重建出样品多少三维结构? 倾转范围覆盖到哪里,就只能重建到哪里。样品转不到所有角度,总有一块楔形区域的方向没拍到,重建出来的结构会沿电子束方向被拉长。平均更多份相同的结构能压低噪声,却补不上这些角度。
放置标记、改变样品深度,再记录一组倾转投影。查看横向和深度切片,比较标记出视野、观察方向缺失各会留下什么痕迹。
物理教程
背景断层成像用许多倾转角下的投影重建三维物体。这里你记录投影,对齐、滤波后重建,再查看结果的正交切片和缺失楔。
为什么值得理解样品只能倾转到一定角度,有些观察方向永远记录不到,重建只能在缺少它们的情况下进行。
先抓重点
倾转轴沿样品的竖直方向。在这个标量模型里,每个相机像素测的是沿一条射线的积分。
已知的冰基线被扣掉了,但它吃掉的计数和带来的噪声还在。每一帧冷冻图像对曝光期间的密度积分,而密度按设定规律随剂量变化。
角度上的梯形权重只覆盖记录过的角度。可选的三点低通滤波能压低噪声,也会把细节变软。缺失楔不会被重新归一化抹掉。
容易误解完成目标就得到标定冷冻流程或真实解析结构。
正确理解完成目标只说明在这个教学模型里成功了。这是沿平行射线做标量吸收的教学模型,不是相衬冷冻电镜,也不是标定过的显微镜。密度是虚构的高斯分布。冰的平均自由程设为 350 纳米,样品随剂量衰减,衰减尺度为每平方纳米 200 个电子。计数可以按固定种子的统计随机生成,也可以选用明确标注的期望计数快照。计数取负对数后,经有限 Ram-Lak 滤波和有限角度反投影;处理过程不读取真值。标记坐标、大小、强度和倾转轴作为标定给出。对齐只用标记条带的计数,在十一种整数水平位移中比较;拟合差距和拟合优度阈值是教学判据。没有标记或无法判定位移时,保留该帧原坐标。三个高斯结构可改变深度,解析尾部无限,相机视野有限。模型不含 CTF、衍射、多重散射、曝光内运动校正和角度精修,也不声称任何实测分辨率。硬件和样品的放大比例只是示意。
先设置标记的横坐标和深度,再改变样品深度比例。随后选择倾转范围、间隔、剂量与漂移。标记固定在避开主要样品结构的已知条带内。
你会看到: 总剂量由所有帧分摊,增加角度就会改变每帧的计数。采集新序列。选择记录帧,观察相机计数与物理倾角。
你会看到: 这时再改采集参数,存储的序列不会变,要等下一次采集。打开标记对齐,选择滤波器后重建。试着移除标记,或把它放到相机边缘;先检查有多少帧能确定位移,再解释重建体。
你会看到: 蓝色负旁瓣、沿深度拉长的结构和角度缺口,都是从不完整投影重建时留下的痕迹。把正交切片和单独用金色显示的输入对比,然后核对目标。
你会看到: 参考相关和误差是在同一网格上做的教学检验,不是实测分辨率。